Отбор проб для обнаружения возбудителей комплекса респираторных заболеваний у свиней: бронхоальвеолярный лаваж или соскоб с бронхов?
Многие ветеринары находят соскоб с бронхов менее инвазивным и, прежде всего, более простым методом отбора проб, чем бронхоальвеолярный лаваж.
Рисунок 1. Схематический рисунок, показывающий бронхоальвеолярный лаваж и соскоб с бронхов
Респираторные заболевания у свиней имеют множественные причины с участием различных факторов: возбудители инфекций, питание и факторы организации производства, провоцирующие развитие болезни, такие как температура, вентиляция, плотность размещения, условия содержания и т.д.
К наиболее значимым возбудителям инфекций, нашедшим отражение в комплексе респираторных заболеваний у свиней (КРЗС), относятся:
- Бактерии: микоплазма гиопневмонии, актинобациллярная плевропневмония, гемофилюс парасуис, пастерелла мультоцида, свиной стрептококк и микоплазма гиоргинис.
- Вирусы: вирус РРСС, вирус гриппа, ЦВС-2, респираторный коронавирус.
- Паразиты: нематоды рода Metastrongylus.
В лабораторном анализе содержится подробная информация о наличии возбудителей инфекций, вовлеченных в патологический процесс, что позволяет принять более взвешенное решение относительно реализации эффективных мер. В зависимости от наличия и цели анализа (диагностика клинических случаев или мониторинг фермы), можно проанализировать различные типы проб (Таблица 1.)
ТАБЛИЦА 1: Тип дыхательных проб, преимущества и недостатки.
- Идеальная проба, когда есть смертельные случаи.
- Позволяет провести полную диагностику.
Требуются мертвые или забитые животные.
Животное, из которого была получена проба, может быть не репрезентативным для данной группы
Отбор проб у живых животных.
Можно брать пробы у большого количества животных.
Позволяет использовать методы получения патогенной культуры, пробы на чувствительность микроорганизма к лекарственному препарату и ПЦР.
Предоставляется информация о возбудителях, присутствующих в легких.
Отбор проб требует обученного персонала и специальных средств. .
Гистопатологическое исследование не может быть выполнено.
Получение проб от большего количества животных при одном отборе.
Позволяет осуществлять поиск как антигенов (ПЦР), так и антител (ТИФА).
Хорошая система мониторинга на бессимптомных фермах
Больные животные обычно не взаимодействуют с веревками.
Не может быть представлена микробиологическая культура.
Хранение проб имеет решающее значение для обеспечения хороших результатов.
Гистопатологическое исследование не может быть выполнено.
- Простота отбора проб.
Наличие непатогенных штаммов в верхних дыхательных путях.
Возбудители, присутствующие в легких, могут быть пропущены.
Гистопатологическое исследование не может быть выполнено.
Бронхоальвеолярные лаважи и соскоб с бронхов (рисунок 1) очень результативны в случае респираторных проблем у животных, демонстрирующих респираторные признаки, такие как кашель или одышка, но без смертельных случаев. Это позволяет отбирать пробы у значительного количества животных, группируя их по возрасту, загону или стадии производства. Это обеспечивает точной информацией о микроорганизмах, присутствующих в легких.
Рисунок 1. Схематический рисунок, показывающий бронхоальвеолярный лаваж и соскоб с бронхов
Эта методика является простой и быстрой при условии, что лицо, собирающее пробы, знакомо с ней. Следующий видеоролик демонстрирует технику. Доступ может быть оральным или назальным и, в зависимости от типа доступа и возраста животного, должны быть в наличии различные типы катетеров.
Процедура в отношении соскоба с бронхов такая же, как и для лаважа, за исключением введения солевого раствора. Как только катетер достиг бронхов, то катетер удаляют и его наружную часть подсоединяют к шприцу, содержащему 1-2 мл стерильного солевого раствора.
Чтобы оценить эффективность каждого метода отбора проб для выявления вышеупомянутых возбудителей инфекций, было проведено исследование, сравнивающее результаты, полученные при использовании бронхоальвеолярных лаважей и соскобов с бронхов, используя метод ПЦР в режиме реального времени (КПЦР).
Исследование проводилось на группе из 68 животных, взятых из трех разных ферм. К этой группе относились животные на основных стадиях производства: подсосные поросята (количество = 1), поросята-отъемыши (количество = 11), свиноматки (количество = 17), собственные ремонтные животные (количество = 12) и свиньи на откорме от 30 до 100 кг (количество = 27).
У каждого животного брали бронхоальвеолярные лаважи и соскобы с бронхов. Впоследствии для получения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) при каждой пробе использовали автоматическую экстракционную систему, а наборы для проведения КПЦР использовали для молекулярного определения следующих показателей: вирус РРСС, ЦВС-2, вирус гриппа A, микоплазма гиопневмонии, микоплазма гиоргинис, актинобациллярная плевропневмония, гемофилюс парасуис и свиной стрептококк. Все пробы со значением Cq <38 считались положительными.
Все возбудители инфекций были обнаружены в обоих типах проб; результаты показаны в таблице 2.
Таблица 2: Результаты КПЦР для показателей, проанализированных в обоих типах проб, выраженные в процентах от положительных образцов.
ПОКАЗАТЕЛЬ ЛАВАЖ СОСКОБ Вирус РРСС 31.1 30.7 ЦВС-2 3.9 4.0 Вирус гриппа A 2.6 5.3 Микоплазма гиопневмонии 26.0 29.6 Микоплазма гиоргинис 62.3 77.3 Актинобациллярная плевропневмония 16.9 22.7 Гемофилюс парасуис 44.2 46.7 Свиной стрептококк 50.0 87.84
Учитывая небольшой размер выборки, результаты были статистически сопоставлены с использованием точного критерия Фишера. Существенные различия были обнаружены только для определения микоплазмы гиоргинис и свиного стрептококка. Обнаружение в отношении этих показателей было выше в пробе, полученной путем соскоба с бронхов. Никаких существенных различий в уровне обнаружения для других исследованных показателей не наблюдалось.
Многие ветеринары на местах находят соскоб с бронхов менее инвазивным и, прежде всего, более простым методом отбора проб, чем бронхоальвеолярный лаваж. В дополнение к этим преимуществам у соскоба с бронхов необходимо учитывать эквивалентную или даже лучшую способность обнаружения основных патогенов, представляющих интерес в КРЗС. Последующие исследования должны проводиться с большими объемами выборки, чтобы детально проанализировать другие переменные, такие как возраст животных и количественные результаты у соответствующих возбудителей. Тем не менее, можно сделать вывод, что соскоб является эффективным методом отбора проб, и он может быть провозглашен в качестве действенной альтернативы в отношении бронхоальвеолярных лаважей.